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口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病。该病给养殖业带来巨大经济损失,被世界卫生组织列为a类传染病。口蹄疫病毒复杂多变、血清型巨多、传播迅速、难以防治, 口从临床表现难以确诊，极易与其症状相似的疾病混淆，比如猪水疱和水疱性口炎、塞尼卡病毒感染，所以,准确而快速的诊断技术成为防治该病的必要措施。
目前,随着养殖规范化，猪群经过疫苗预防，已经大大减少该病的发病率。但还有很多养殖朋友认为只要免疫了疫苗，猪群就不会患病，打几次、打几针、什么时候打，都没有清晰的概念，所以有必要将口蹄疫抗体检测工作作为现代化养殖中疫病监测的常态化工作。鉴于此，本文针对口蹄疫检测的常用方法、影响因素、抗体检测等方面简单进行论述，给广大养殖朋友参考。
1、口蹄疫检测方法
目前口蹄疫的实验室诊断主要有两种方法，一种就是血清学的诊断，一种就是elisa诊断试剂盒。
1.1血清学诊断
1.1.1凝集抑制试验
有些病毒具有凝集某种动物红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的试验称血球凝集试验,通过血凝与血凝抑制试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的抗体滴度。
1.1.2病毒中和试验(vnt)
毒中和试验(vnt)也称血清中和试验,fmdv血清型划分的依据是型间无交叉免疫保护性,中和试验是型别鉴定的重要方法之一。该方法是最经典和最有权威性的检测方法,常用作其他方法的参照。vnt是利用血清中和抗体与病毒特异性中和作用,使病毒丧失对易感动物和敏感细胞的感染力的原理而建立起来的,vnt既可鉴定抗原,又可对抗体进行定量测定。
1.1.3补体结合试验（cft）
cft 是国际通用的 fmdv 经典定型方法（也曾用于亚型鉴定）。cft 原理是在抗原-抗体系统和溶血系统反应时均有补体参与，以溶血系统作为指示剂，限量补体测定病毒抗原。当病毒抗原与血清抗体发生特异反应形成复合物时，加入的补体与复合物结合而被消耗，溶血系统中无游离补体便不出现溶血，结果显示阳性。
1.1.4反向间接血凝试验
把fmdv 抗体偶联于醛化脱敏的绵羊红细胞上，抗体吸附在红细胞表面和游离抗原结合，形成抗原-抗体凝集网，绵羊红细胞凝集一起，呈现肉眼可见的红细胞凝集现象。此方法方便、具有良好的可操作性，故此便于临床应用，在国内 fmd 检测业内共同认可的方法。
1.2酶联免疫吸附试验(elisa)
elisa作为一种新的诊断方法在近些年来得到飞速发展,经过许多研究者多年的努力,现已形成液相阻断elisa、固相竞争elisa以及间接夹心ellsa等多种elisa诊断方法。
1.2.1液相阻断elisa
该诊断方法是预先滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被了 fmdv特异性抗体的 elisa 板中，之后依次加入检测抗体,酶结合物,显色底物和中止反应液,最后用酶标仪判读结果,如被检血清含有某型抗体,必然与同型病毒抗原结合。最后按试验孔呈现的颜色与抗原对照(未加血清)孔呈现的颜色相比判定结果。由于病毒在液相状态下其抗原处于自然状态可以和血清更好的反应。所以,不用特定培养分离病毒,使得对于口蹄疫的诊断环境要求更加简便。液相阻断elisa可以快捷、准确、灵敏的检测出血清中抗体含量。
1.2.2间接夹心elisa
间接夹心elisa,主要用于鉴定毒型,分析疫苗毒株与流行毒的抗原谱关系,克服了补体结合试验样品定型率低的缺点。该方法能反映出疫苗毒与流行野毒株间的抗原相关程度,推测相应的免疫保护效力,评价疫苗毒的免疫覆盖率。
1.3分子生物学诊断技术
该方法是指在特定的条件下,以被检病料中少量的病原遗传物质为模版,在体外迅速扩增该遗传物质的过程，常见实验室方法有：聚合酶链式反应(pcr)。pcr可在数小时内对仅有几个拷贝的基因放大数万倍,使其在凝胶电泳后形成明显可见的dna条带。对pcr扩增片段测定核苷酸序列后,可以确定被查毒所属的基因型和基因亚型,进而追踪疫源，并作为选择疫苗的依据。但这种方法需要较高的试验设备和分子生物学技术,所以目前只在一些试验室用于口蹄疫的诊断和检测。
以上是目前比较常用的口蹄疫检测方法，其中最为广泛使用的是elisa诊断试剂盒，结果准确，时间短，只要严格按照说明书进行操作就可以，具有较高的实效性，对于基层动物实验室的建设而言，是可以应用和推广的。
2、影响检测的主要因素
2.1样本因素
在冰箱中保存过久的标本，在测定中会导致本底过深、造成假阳性，为克服上述干扰，elisa测定的血清标本宜为新鲜采集，如不能立即测定，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存。冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
2.2操作因素
样品在检测过程中，涉及到较多的仪器和操作步骤，对实验人员要求较高，任何的操作偏差都可能导致实验失败或者结果偏差较大。
2.3试剂因素
elisa检测试剂厂家较多，不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。在这里，特别推荐兰州兽医研究所生产的检测试剂盒，经过多年检验，其质量可靠，检测准确，具有很好的稳定性。
3、抗体检测、评价疫苗质量及免疫效果、制定免疫程序
口蹄疫抗体检测是评价疫苗免疫效果的主要方法，只有免疫猪群抗体水平达到一定的滴度才能防止相应病原的感染。疫苗质量的高低直接决定了疫苗免疫整体效果的优劣，各疫苗生产厂家的生产工艺、毒株、疫苗的安全性、稳定性和可控性都各不相同，疫苗的质量彼此间差别很大。疫苗在保存、运输、使用等诸多环节过程中有可能受外界环境尤其是高温、日晒的影响，都将导致疫苗质量严重下降。
猪群受到猪圆环病毒病、蓝耳病等其他免疫抑制疫病的影响，以及受到饲喂霉变饲料等日常不良饲养管理的影响，均可造成疫苗免疫效果下降，疫苗免疫失败。通过免疫猪群的抗体检测，可以了解疫苗免疫注射后猪群是否产生了抗体，以及抗体水平的高低是否可以抵抗病原的感染，故依据抗体水平检测的结果在很大程度上可对疫苗质量进行评价，对疫苗免疫效果进行评估。同时，对未进行疫苗免疫猪群进行抗体检测可了解掌握猪群野毒感染情况，为制定猪场疫病综合防控方案提供重要参考依据。
综上所述，口蹄疫抗体检测是临床诊断的重要手段之一，也是免疫猪群免疫水平监测的重点之一，对口蹄疫流行状态的监测、疫苗免疫效果的评价及免疫程序的修订等均具有重要的指导意义。随着我国养猪产业新技术和新模式的不断应用，依靠经验主义的免疫程序和免疫方法已不能满足现代化规模养殖的需求，定期开展抗体检测工作，制定科学合理的免疫程序，已成为猪病综合防控中不可缺少的一项重要措施。相信随着人们对抗体检测工作的日益重视，以及各种猪病抗体检测方法的不断发展，抗体检测在猪病的综合防控中将是不可或缺的重要一环，从而保障我国养猪业快速、健康发展。（资料来源：陈明帅 中牧生物）